茶氨酸的研究進展

啉 Ｎ 羥基琥珀酰亞胺基 氨基甲酸酯(ＡＱＣ)作為衍生試劑,以乙腈和水作為流動相,梯度洗脫,紫外或熒光檢測器檢測,該法簡稱為ＡＣＣＱ ＴＡＧ法。在日本學者莽也邦夫等采用高效液相色譜法測定了茶葉中茶氨酸含量之后,我國學者郭升平對用高效液相色譜測定茶葉中茶氨酸進行了較詳細的研究[13],他采用ＷａｔｅｒｓＭ344高效液相色譜儀,以ＰＩＴＣ柱前衍生,反相Ｃ18柱分離(Ｗａｔｅｒｓ的Ｐｉｃｏ ＴａｇＴＭＨＡＡ柱),柱溫43℃,梯度洗脫,用Ｍ990二極管陣列檢測器,在ＵＶ243ｎｍ檢測。在研究中他對用乙酸乙酯提取、用80%乙醇回流3ｈ提取和經(jīng)鹽酸水解等前處理的方法進行了比較,發(fā)現(xiàn)茶氨酸不能以酸水解方式提取,否則茶氨酸會分解成谷氨酸,而使測定結(jié)果偏低。隨著近年來分析技術(shù)和分析手段的不斷提高,毛細管電泳技術(shù)和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)也應(yīng)用到了茶氨酸檢測領(lǐng)域。ＫｉｅｈｎｅＡ等報道了采用熱噴霧液質(zhì)聯(lián)用儀分析茶葉中多酚類物質(zhì)的方法[14],他們通過測定其準分子離子峰同時測定了茶葉中的兒茶素、黃酮醇糖甙、黃酮糖甙及咖啡因、可可堿和茶氨酸。ＡｕｃａｍｐＪＰ等則研究了用毛細管電泳儀同時進行兒茶素、茶氨酸、咖啡因及沒食子酸、抗壞血酸分析的方法[15]。目前,高純度的茶氨酸主要通過細胞組培、化學合成、微生物發(fā)酵和離子交換樹脂分離等方式獲取。人們用14Ｃ示蹤的方法早已證實了茶樹中茶氨酸合成前體是谷氨酸和乙胺。一般認為當培養(yǎng)基中乙胺的濃度為25ｍＭ時,茶葉愈傷組織的茶氨酸的生物合成為最大值。1998年陳瑛等研究了多種激素對茶愈傷組織合成茶氨酸的影響[16],他們對生長素(ＩＡＡ)、萘乙酸(ＮＡＡ)、吲哚丁酸(ＩＢＡ)、2,4 二氯苯氧乙酸(2,4 Ｄ)、6 芐基腺嘌呤(6 ＢＡ)、玉米素(ＺＴ)、激動素(ＫＴ)、和三十烷醇(ＴＡ)的不同濃度、不同配比進行試驗,得出了茶愈傷組織生長和茶氨酸積累的較佳培養(yǎng)條件。除了利用細胞組織培養(yǎng)茶氨酸之外,化學合成也是得到高純度茶氨酸的有效方法[17]。采用化學合成手段制造氨基酸始于二十世紀五十年代,它具有價格低,成本低,適合工業(yè)化生產(chǎn)的特點。但是化學合成制造的都是ＤＬ 型消旋體,需要進行拆分才能得到Ｌ 型產(chǎn)品。日本學者在這方面作了大量的工作,他們采用微生物固化酶分離ＤＬ 型氨基酸取得了成功。采用微生物發(fā)酵法可直接得到Ｌ 型氨基酸,但反應(yīng)時間較長,設(shè)備規(guī)模較龐大,副產(chǎn)物也較多,需要進一步分離精制,成本相對較高。因此建立在化學合成法和微生物發(fā)酵法基礎(chǔ)上的酶轉(zhuǎn)化法或稱酶工程技術(shù)應(yīng)運而生了。這種技術(shù)是應(yīng)用特定酶的催化作用 ,使某些化合物轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的Ｌ 氨基酸。ＨｉｄｅｙｕｋｉＳｕｚｕｋｉ等報道了他們把這一技術(shù)應(yīng)用到茶氨酸的制備中的最新研究成果[18],他們利用從細菌中得到的谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶作催化劑,將200ｍＭ谷氨酸和1 5Ｍ乙胺在ｐＨ為10,溫度為37℃的條件下,保持2小時,獲得120ｍＭ茶氨酸,轉(zhuǎn)化率為60%。茶氨酸作為兩性物質(zhì),選擇適當?shù)模穑戎?用離子交換樹脂分離提取也是一種有效的手段,但這方面的報道并不多見。1998年陳瑛等報